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Biotecnología
Algunos comentarios sobre las pruebas de termorresistencia en semen para pronosticar su fertilidad
En Animal Reproduction Science 113 (2009) 279 - 282 he leído un interesante trabajo de los autores brasileños F. P. Vianna, F.O. Papa, F.S. Zahn, C. M. Melo, J. A. Dell´Aqua Jr , (quienes se desempeñan en FMVZ, Departamento de Reproducción Animal y Radiología Veterinaria, Universidad del Estado de Sao Paulo, Distrito de Rubiao Júnior s/nº, 18618 – 000 Botucatu, SP, Brasil, papa@fmvz.unesp.br), sobre que las pruebas de termorresistencia en semen no son predictivas de la fertilidad potencial de semen criopreservado de toro a pesar que una serie de estudios informan de una correlación positiva entre características seminales evaluadas en el laboratorio y fertilidad (1, 2 ). A pesar de las dificultades que existirían para diagnosticar la fertilidad real, seguiría existiendo la tendencia de simplificar la naturaleza biológica de la subfertilidad culpando al toro o al inseminador (6).
   Algunos tests fueron usados a diferentes temperaturas y durante períodos largos 5, 1 . La incubación durante 2,5 y 4,5 horas afectó el porcentaje de espermatozoides mótiles a 15, 20 o 30 º C 8 . Otros autores incubaron semen congelado/descongelado a 37ºC durante períodos de 0,3 y 6 h y verificaron una marcada disminución sobre la motilidad total y la integridad de los acrosomas 3 .
   
    Dimitropoulus 5 describió una prueba lenta de termorresistencia en la que los zoides eran incubados a 38ºC durante 5 horas y después se evaluó el porcentaje de zoides con motilidad progresiva y se la pudo correlacionar positivamente con fertilidad mediante las tasas de no-retorno a 60-90 días. Esta prueba ha sido usada durante varios años y todas las dosis de semen descongelado que tenían menos del 20 % de zoides mótiles después de la prueba lenta eran sistemáticamente eliminadas 6 .
   
    Barnabe y otros 2 usaron semen congelado en ampollas para evaluar la prueba de termorresistencia y verificaron que la motilidad progresiva promedio era del 46,2 % inmediatamente después del descongelamiento, disminuyendo hasta 19,8 % después de la prueba rápida y hasta 6,1 % después de la lenta. Estos resultados sugieren que la eliminación sistemática de todas las dosis con menos del 20 % de motilidad progresiva después de la prueba lenta no era aplicable a esas dosis, pues ya habían sido comercializadas sin recibirse posteriormente quejas por las tasas de fertilidad logradas.
   
    Nagy y otros 7 sometieron zoides de toro a incubación a 37ºC durante 4 horas para evaluar alteraciones en el plasma y las membranas acrosomales observando que la población de zoides vivos con acrosoma intacto decreció ligeramente, los zoides muertos con acrosoma intacto disminuyeron del 37,4 % al 17,4 % mientras los zoides muertos con acrosomas dañados aumentaron del 18 % al 35 %. En este experimento el aumento de la exocitosis del acrosoma fue verificada por PE-PNA (peanut agglutinin fluorescent conjugate = conjugado de aglutinina fluorescente de maní).
   
    Los autores del trabajo brasileño que comento usaron en su investigación 64 eyaculados de 39 toros Nelore, de 2 a 10 años de edad, de un centro de I. A. de Valparaíso/Sp/Brasil. Se examinó el semen fresco y el congelado y se lo procesó en diluyente a base de Tris. La descongelación se efectuó en baño maría a 37ºC durante 30 s. El contenido de las pajuelas fue trasvasado a tubos de ensayo de 5 ml cerrados que fueron evaluados en cuanto a motilidad después de pruebas de termorresistencia lenta y rápida (38º C/5 h y 46º C/30 min, respectivamente) por técnicas convencionales y computarizadas (HTM IVOS 12).
   
    Los resultados de motilidad total (TM) fueron separados por grupos: GO (= % TM); G1 (1-20 % TM); G2 (21-40 % TM); G3 (>40 % TM) , tanto para pruebas de termorresistencia lenta (STT) como rápida (RTT). Para verificar la fertilidad de cada grupo se realizaron 4920 inseminaciones en vacas Nelore de diferentes edades y la fertilidad fue establecida mediante palpación rectal después de los 90 días.
   
    El análisis estadístico se realizó con InStat 3 (Graph Pad Software Inc., USA).
   
   Las tablas que siguen consignan los porcentajes de fertilidad obtenidos.
   
   

   
   
   El grupo RTT 2 tuvo la menor tasa de preñez (P < 0,05) a pesar que su motilidad total estuvo por encima del mínimo recomendado para esta prueba y fue superior a la motilidad total de los grupos 0 y 1. Esto puede ser debido al gran número de inseminaciones.
   
   Las tasas de fertilidad de los grupos 2 y 3 no fueron superiores que las de los grupos 0, 1 y 2, lo que demostraría, según los autores, que una motilidad total mayor después de RTT o STT pueda no corresponder a mayor cualidad y longevidad de semen congelado de toro. Los resultados de fertilidad de los grupos 0 y 1 de STT demostraron que el semen considerado inferior al estandard mínimo que es recomendado, puede dar altas tasas de fertilidad después de un primer servicio. Los resultados de los correlatividades entre motilidad total y fertilidad fueron menores para ambos, RTT y STT (r = 0,11 y 0,14; respectivamente) sugiriendo que estas pruebas no deben ser usadas como las únicas para predecir la fertilidad de semen congelado de toro.
   
    Esta experiencia brasileña no evidencia una correlación positiva entre las pruebas de termorresistencias rápida o lenta y la fertilidad lograda con semen congelado de toro visto que las dosis que tuvieron tasas de motilidad inferiores a los valores críticos establecidos para las pruebas dieron tasas de preñez similares a las obtenidas cuando se usó dosis con mayor motilidad. Estos resultados no igualan a los logrados por Dimitropoulus comentados, quien verificó una correlación positiva y significativa entre la motilidad lograda con prueba de termorresistencia lenta y fertilidad evaluada por no retorno a los 60-90 días ni tampoco a otros que recomendaron la eliminación de todas las dosis con menos de un 20 % de zoides mótiles después de la prueba (ver Jondet y Rabadeux).
   
    Los resultados brasileños coinciden con los relatados por Arruda y otros por cuanto las dosis que tuvieron motilidad superior a los valores críticos habían sido divididas en dos categorías – 21 a 40 % y > 40 % para verificar posibles diferencias en tasas de preñez que, sin embargo, no ocurrieron.
   
    Aparentemente parece ser que la disminución de la motilidad en las dosis sometidas tanto a termorresistencia rápida como lenta es debida a una deficiencia metabólica producida en zoides sometidos a condiciones de temperatura elevada durante periodos prolongados. Se cree que esta temperatrura causaría un aumento del metabolismo espermático llevando a una utilización más rápida de los constituyentes de los diluyentes, dando como resultado un déficit energético.
   
    Los autores concluyen que sus resultados indicarían que las pruebas de termorresistencia no simulan condiciones uterinas, como lo sugiriera Dimitropoulus, y recuerdan que el tracto genital femenino contiene muchas substancias, como antioxidantes, hormonas y factores nutricionales, que podrían apoyar el mantenimiento de los zoides hasta el momento de la fertilización. Concluyen que sus estudios indican que las pruebas de termorresistencia son demasiado extremistas y no deberían ser usados como únicas para predecir la fertilidad de semen congelado de toro.
   
   Bibliografía:
   
   1. Arruda, R.P., Barnabe, V.H., Alencar, M.M., Barnabe, R.C., 1992. Evaluation of frozen bull semen. Quick and slow thermoresistance tests: effects on fertility. Bras. J. Vet. Res. Anim. Sci. 29, 131–137.
   
   2. Barnabe, V.H., Barnabe, R.C., Visintin, J.A., Viana, W.G., Casagrande, J.F., Almeida, C.A., 1980. Estudo comparativo entre as provas rápida e lenta de termoresistência para avaliac¸ ão de sêmen congelado. Rev. Bras. Reprod. Anim. 4 (3-4), 6–12.
   
   3. Coulter, G.H., Foote, R.H., 1974. The motility, acrosomal morphology and oxygen uptake of bull spermatozoa during processing and after freezing in straws. A. I. Digest 22, 12–15.
   
   4. Curi, P.R., 1998. Metodologia e análise da pesquisa em ciências biológicas, 2nd edition. Tipomic, Botucatu, Brazil.
   
   5. Dimitropoulos, E., 1967. La signification du test de la thermoresistence dans l’appreciation de valeur fécondante du sperme congelé. Ann. Méd. Vet. 4, 215–224.
   
   6.. Jondet, R., Rabadeux, Y., 1976. Utilisation du test de thermoresistance dans l’appreciation de la valeur du sperme congele de taureau. Elev. Insemin. 156, 13–20.
   
   7. Nagy, S., Hallap, T., Johannisson, A., Martinez-Rodriguez, H., 2004. Changes in plasma membrane and acrosome integrity of frozen-thawed bovine spermatozoa during a 4 h incubation as measured by multicolor flow cytometry. Anim. Reprod. Sci. 80, 225–235.
   
   8. Pursel, V.G., Johnson, L.A., Rampacer, G.B., 1972. Acrosome morphology of boar spermatozoa incubated before cold shock. J. Anim. Sci. 34, 2.
   
   9. Saacke, R.G., Dalton, J.C., Nadir, S., Nebel, R.L., Bame, J.H., 2000. Relationship of seminal traits and insemination time to fertilization rate and embryo quality. Anim. Reprod. Sci. 60–61, 663–677.
   
   
   Por Jorge E. B. Ostrowski

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